الف) مقدمه
الکتروفورز یک روش آنالیزی در بیوشیمی و سایر علوم زیستی میباشد که برای جداسازی مولکولهای باردار در یک میدان الکتریکی به کار میرود. الکتروفورز ژل سدیم دودسیل سولفات پلیآکریلامید (Sodium Dodecyl Sulphate- Polyacrylamide Gel Electrophoresis) نوعی الکتروفورز است که در آن از سدیم دودسیل سولفات استفاده میشود تا تاثیر ساختار و بار مولکولهای پروتئین حذف گردیده و پروتئینها تنها بر اساس طول زنجیره یا وزن مولکولی تفکیک شوند. در این روش مولکولهای کوچک به دلیل مقاومت کمتر ماتریکس ژل سریعتر از مولکولهای بزرگتر حرکت میکنند و در نتیجه مسافت بیشتری را در ژل طی میکنند. SDS-PAGE یک سیستم الکتروفورزی ناپیوسته است که توسط لاملی ابداع شده است و توانایی تفکیک پروتئینها با وزن مولکولی حدود ۵ الی ۲۵۰ کیلودالتون را دارد. در سیستم ناپیوسته ژل دارای دو بخش ژل متراکم کننده (Stacking gel) با pH 6.8 و ژل جداکننده(Resolving gel) با pH 8.8 میباشد که در ژل متراکم کننده دارای منافذ بزرگتر، پروتئینهای بارگذاری شده تغلیظ و آماده تفکیک بر اساس وزن مولکولی در ژل جداکننده میشوند.
با وجود اینکه SDS-PAGE به دستگاه گران قیمت نیاز ندارد و روش انجام آن به نسبت آسان است، ولی، اهداف و کاربردهای آنالیزی گستردهای دارد. از جمله کاربردهای تحقیقاتی آن میتوان به تعیین درجه خلوص یک پروتئین، بررسی الگوی پروتئینی یک سلول، بررسی بیان یک پروتئین نوترکیب، تعیین وزن مولکولی نسبی یک پروتئین، اثبات حضور پیوندهای دی سولفیدی در پروتئینهای چند زیرواحدی، حتی تفکیک الیگونوکلئوتیدها و همچنین مرحله اول وسترن بلاتینگ اشاره کرد.
کیت حاضر شرکت آرسام فرا زیست برای الکتروفورز رایج پروتئین یعنی الکتروفورز در شرایط دناتوره احیایی تهیه شده است. محتوای کیت برای 25 و یا ۵۰ مینی ژل کافی است. صرفه جویی در زمان و هزینه های خرید مواد سازنده کیت، صرفه جویی در زمان تهیه و آماده سازی محلولهای سازنده، حذف هزینه آنالیز نمونه توسط شرکت های مربوطه و انجام الکتروفورز نمونه توسط خود محقق به خاطر روش کار ساده کیت از امتیازات ویژه کیت حاضر میباشد.
ب) محتوای کیت
نگهداری کیت:
نکته:محلول 10% آمونیوم پرسولفات بهتر است به مقدارکم و تازه تهیه شود، به عنوان مثال میتوان mg ۵۰ ازآنرا در ml 5/0 آب دوبار تقطیر حل کرد.
موارد مورد نیاز که در داخل کیت موجود نیست:
- تانک الکتروفورز
- منبع تغذیه
- سرنگ همیلتون
- مارکر یا نردبان پروتئینی
- محلول رنگبری
نمونه ای از ژل هایی که با کیت SDS-PAGE شرکت آرسام فرا زیست ران شده اند
با کلیک بر روی دکمه مقابل میتوانید دستور العملهای مربوط به این محصول را مطالعه کنید مشاهده دستور العملها