الف) مقدمه

یکی از مکانیسم‌های آسیب سلولی در جانوران و گیاهان پراکسیداسیون لیپیدی می‌باشد. پراکسیدهای لیپیدی شاخص‌های بسیار ناپایداری از استرس اکسیداتیو در سلول‌ها می‌باشد که با تجزیه به ترکیبات واکنش­ پذیری مثل مالون دی‌آلدهید (MDA) و 4-هیدروکسی نئوننال (4-HNE) تبدیل می‌شوند. اکسیداسیون لیپیدها در in vitro بواسطه انواع فاکتورهای پرواکسیدانت و در in vivo  در اثر بسیاری از بیماری‌ها یا پیری رخ می‌دهد. سنجش محصول نهایی پراکسیداسیون لیپیدی یکی از روش های مقبول برای اثبات آسیب اکسیداتیو می‌باشد. فراورده‌های آلدهیدی فوق به عنوان مارکرهای استرس اکسیداتیو پذیرفته شده‌اند.

مواد واکنش­پذیر با تیوباربیتوریک اسید((TBARS یک سنجش رایج برای نشان دادن پراکسیداسیون لیپیدی می‌باشد. پروتکل حاضر یک روش ساده و سریع در بررسی نمونه‌های دارویی، غذایی، انسانی، جانوری و گیاهی می‌باشد. از نظر مکانیسمی MDA با نسبت 1:2 با تیوباربیتوریک اسید ترکیب می‌شود (شکل 1).

ترکیبMDA-TBA  از واکنش MDA موجود در نمونه‌ها با TBA تشکیل می‌شود و می‌توان مقدار آن را با اسپکتروفتومتر اندازه‌گیری کرد. سطح و مقدار TBARS را می‌توان از طریق استاندارد MDA تعیین کرد.

آزمون TBARS اطلاعات وسیعی از فعالیت رادیکال‌های‌ آزاد شده شرایط مختلف از قبیل بیماری‌ها و اثرات پراکسیدانت‌ها و آنتی اکسیدانت بدست می‌دهد. اگرچه اختصاصیت TBARS برای ترکیبات دیگری غیر از MDA بحث برانگیز است اما این روش برای نمایش پراکسیداسیون لیپیدی یک روش پذیرفته شده است. لیپیدهای دارای اسیدهای چرب غیر اشباع مقادیر TBARS بیشتری تولید می‌کنند. TBARS مداخله‌گر محلول موجود در نمونه را می‌توان با رسوب دادن لیپوپروتئین‌ها توسط اسید مثل اسید استیک به حداقل رساند.

نمونه‌های بیولوژیکی ممکن است دارای مخلوط از مواد واکنش‌پذیر با تیوباربیتوریک ‌اسید(TBARS) مثل هیدروپراکسیدها و آلدهید داشته باشند. هرگاه مقادیر TBARS بالایی به دست آمد باید سنجش‌های اختصاصی‌تری از قبیل HPLC بکار گرفته شود.

کیت شرکت آرسام فرا زیست یک سیستم ساده، تکرار پذیر و ارزان قیمت برای بررسی پراکسیداسیون لیپیدی در نمونه‌های ادرار، پلاسما، سرم، لیزات سلولی، هموژنات بافتی و حتی نمونه­های غذایی مثل کباب، چیپس و سایر سرخ­کردنی­ها می‌باشد. همچنین کیت حاضر دارای استاندارد MDA به عنوان کنترل مثبت می‌باشد. هر کیت دارای معرف‌های کافی برای 100 سنجش توسط اسپکتروفتومتر و بیش از 200 سنجش توسط میکروپلیت ریدر  می‌باشد.

ب) اساس آزمون

آزمون TBARS یک روش کمّی مستقیم در اندازه‌گیری MDA نمونه‌‌های زیستی می‌باشد. نمونه‌های دارای MDA و استانداردهای MDA ابتدا با TBA در   °C95 واکنش می‌دهند. بعد از چند دقیقه انکوباسیون، نمونه‌ها و استانداردها را می‌توان توسط اسپکتروفتومتر یا فلوریمتر سنجش کرد. مقدار MDA  نمونه‌های مجهول را می‌توان با مقایسه آن با منحنی استاندارد MDA  تعیین کرد.

ج) محتویات کیت

موادی که در کیت گنجانده نشده است

• نمونه‌های مجهول دارای MDA، پلاسما، سرم، ادرار، لیزات سلولی یا بافتی
• میکروتیوب و سانتریفیوژ
• هیتربلاک، انکوباتور یا حمام آب گرم
• n- بوتانول
• پلیت ته صاف 96 چاهکی
• میکروپلیت ریدر یا اسپکتروفتومتر

 استاندارد مالون دی آلدهید

با کلیک بر روی دکمه مقابل می‌توانید دستور العمل‌های مربوط به این محصول را مطالعه کنید مشاهده دستور العمل‌ها